产品货号:
SNM288
中文名称:
甘油含量测试盒(微量酶标法)
英文名称:
Glycerol Assay Kit
产品规格:
300T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒可测定血液、细胞培养基、体液、酒类饮料等液体样本中的甘油含量。试剂盒经过优化使得操作简单,最低检测灵敏度10μmol/L,线性范围10~1200μmol/L,可靠性和重复性俱佳。适合生物医学、食品实验室检测。
在ATP存在下甘油被甘油激酶磷酸化为3-磷酸甘油,再被甘油磷酸氧化酶氧化产生过氧化氢;在过氧化氢酶作用下生色底物转化为苯醌亚胺,光密度值与甘油浓度成正比。
甘油是甘油三酯的水解产物。甘油三酯水解生成1分子甘油和3分子游离脂肪酸,称为脂肪分解。脂蛋白酯酶水解血中甘油三酯;胰脂酶水解食物中的甘油三酯;激素敏感脂肪分解酶水解脂肪细胞中的甘油三酯。与游离脂肪酸一样,甘油含量是甘油三酯水解反应的可靠检测指标,但检测更加方便。本试剂盒采用甘油磷酸氧化酶法与经典GPO Trinder酶学反应,通过比色测定液体样品甘油含量。
组分 | 规格 |
试剂R1 | 40mL |
试剂R2 | 10mL |
4mM甘油标准品 | 1mL |
保存:4℃,避光,有效期3个月。
本试剂盒可供300~500次微板测定或100次1mL比色杯测定。
酶标仪、可见光分光光度计(721、722型)、生化分析仪。
最佳工作波长550nm,如无此波长建议优先选用570、530、490nm。比色杯光径1cm。
工作溶液的配制:
按试剂R1∶试剂R2= 4∶1比例,即取4mL试剂R1与1mL试剂R2混合,现用现配,用多少配多少。
- 样本处理
- 酒精、饮品、清澈体液样本:直接测定,如超过线性范围用蒸馏水或生理盐水稀释后测定。
- 培养液:取不含酚红无颜色无血清的细胞培养基液,如有细胞碎片应4℃条件下12000g离心5min清除,取上清测定。
- 血液:新鲜抗凝血4℃ 2000g 5min得到血浆,或非抗凝血4℃ 2小时取血清。2000g离心10min除去血细胞。70℃ 10min灭活内源脂肪酶,再次12000g 10min,取上清测定或-20℃保存。
- 酒精、饮品、清澈体液样本:直接测定,如超过线性范围用蒸馏水或生理盐水稀释后测定。
- 标准品稀释
用蒸馏水、生理盐水或与样品缓冲液一致的液体,将4mM甘油标准品倍比稀释为1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 μmol/L,通常4~6管即可,注意设置0浓度对照反应管。 - 甘油测定
- 参见下表加样。先加标准甘油或待测样品,后加工作溶液。甘油浓度很低时,可尝试样品与工作液体积100:100μL能否进一步增加灵敏度,但样品超过100μL将稀释酶浓度而降低灵敏度。超出线性范围可适当稀释,根据稀释倍数计算浓度。
表1.酶标微板测定的加样比例(检测范围10~1200μmol/L,可微量调整样品与工作液体积比例)成分 培养基或低甘油浓度样品测定 高甘油浓度样品测定 空白管 标准管 测定管 空白管 标准管 测定管 蒸馏水/生理盐水 50μL 5μL 标准品 50μL 5μL 样品 50μL 5μL 工作溶液 150μL 150μL 150μL 195μL 195μL 195μL
表2.1mL比色杯测定的加样比例(检测范围10~1200μmol/L)成分 培养基或低甘油浓度样品测定 高甘油浓度样品测定 空白管 标准管 测定管 空白管 标准管 测定管 蒸馏水/生理盐水 200μL 50μL 标准品 200μL 50μL 样品 200μL 50μL 工作溶液 600μL 600μL 600μL 750μL 750μL 750μL - 37℃ 20min(15~30min)。或25℃室温30min但灵敏度略降。反应平衡后颜色在60min内稳定。
- 先用蒸馏水空白管调零,然后测定各管OD值。
- 绘制标准曲线并计算甘油浓度。
- 参见下表加样。先加标准甘油或待测样品,后加工作溶液。甘油浓度很低时,可尝试样品与工作液体积100:100μL能否进一步增加灵敏度,但样品超过100μL将稀释酶浓度而降低灵敏度。超出线性范围可适当稀释,根据稀释倍数计算浓度。
1、细胞培养须用不含酚红的无色无血清培养基。正常血清甘油浓度为20~130μmol/L。任何含血清培养基需彻底洗去。
2、试剂混浊或550nm处空白反应管吸光度大于0.2时弃去。
3、维生素C>0.18g/L、血红蛋白>2g/L、胆红素>0.25g/L、还原剂二硫苏糖醇、巯基乙醇等干扰测试。
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